single-journal

Современные методы трансплантации культивированных клеток кожи и её эквивалентов при лечении ожогов

Алексеев А.А.
Попов С.В.

Одной из главных проблем лечения больных с обширной ожоговой травмой является закрытие раневых поверхностей. Новые возможности для ее решения появились вместе с разработкой механического перфоратора «Meshdermatom» (J.C.Tanner et al., 1964), позволяющeго наносить насечки на аутодермотрансплантат с получением параллельных отверстий одинаковой длины и ровными кожными промежутками. Величина такого трансплантата с коэффициентом перфораций 1:4 при его растяжении в 2-3 раза превосходит первоначальную. В дальнейшем были разработаны другие вариантыи модификации перфораторов.

Однако при обширных глубоких ожогах более 30-40 % поверхности тела закрыть все ожоговые раны при помощи лишь одних перфорированных аутодермотрансплантатов невозможно из-за дефицита донорских ресурсов (С.И.Киселев 1971; Е.Н.Матчин 1975; В.Рудковский с соавт., 1980; В.А.Огольцова 1982; B.J.MacMillan 1982).

В связи с этим разработка альтернативных методов закрытия обширных ожоговых поверхностей остается одним из актуальных вопросов комбустиологии.

Принципиальная возможность использования для заживления ран аутоклеток кожи, выращенных in vitro была показана ещё в сороковых годах в работах профессора зоологии Лондонского университета P.R.Medawar. Однако длительное время исследователям не удавалось получить многослойные пласты аутоклеток, достаточные по площади, способные реально заменить аутодермотрансплантат.

Лишь в середине семидесятых J.Rheinwald и H.Green (1975, 1977) удалось разработать метод культивирования клеток эпидермиса — кератиноцитов, позволяющий в течение примерно 3-х недель получить из биоптата кожи в 3-4 см2 многослойный пласт кератиноцитов в 1000 или даже 10000 раз превышающий первоначальный размер биоптата. В 1980 году Banks-Shlegel и H.Green опубликовали результаты трансплантации культивированных кератиноцитов человека бестимусным мышам, продемонстрировавшие перспективность выбранного направления. О первом клиническом применении аутокератиноцитов, культивированных по методу J.Rheinwald и H.Green у людей сообщил N.E.O’Connor с соавторами в 1981 году в журнале «Lancet». (N.E.O’Connor, J.B.Mulletkin et al. 1981). В статье сообщалось об успешном лечении двух больных с ожогами 80 % и 40 % поверхности тела. Метод лечения заключался в хирургической некрэктомии, временном закрытии образовавшихся ран трупной кожей и трансплантации на раневую поверхность через три недели культивированных аутокератиноцитов. В дальнейшем метод стал внедрятся в клиническую практику ведущих ожоговых центров развитых стран мира (G.G.Gallico, N.E.O’Connor et al., 1984; G.G.Gallico, N.E.O’Connor et al., 1985; S.A.Carney, 1986; M.Kumagai et al., 1988; A.Eldad et al., 1987; M.De Luca et al., 1989; С.Ф.Малахов c соавт.,1993).

Оказалось, что предложенный метод имеет ряд существенных недостатков — длительность подготовки подложек с аутокератиноцитами, непредсказуемое приживление культивированных клеток эпидермиса в среднем от 20-80 %, а в некоторых публикациях от 0 до 85 % (S.R.Herzog et. al. 1988), легкая повреждаемость приживших культивированных кератиноцитов, дискератоз, отслоение эпидермиса в виде пузырей, особенно после трансплантации на раны, полностью лишенных дермы. Препятствием для его широкого распространения стала высокая стоимость, так цены на подложки с культивированными аутокератиноцитами кампании Biosurface Technology (США) для одного больного колеблятся примерно от 10 до 160 тысяч $ в зависимости от площади ран (М.И.Кузин с соавторами 1985; R.Teepe, R.W.Kreis, E.J.Koebrugge et al., 1990; C.C.Compton et al., 1993; L.W.Rue, W.G.Cioffi W.F.McManus et al., 1993; J.M.Rives, Ph.Sellam, B.Karcenty, et al. 1994).

Имеющиеся недостатки явились причиной дальнейшого научного поиска и исследований. Перспективным направлением оказалось использование аллогенных кератиноцитов. Работы J.M.Hefton с соавторами (J.M.Hefton, J.V.Amberson et al. 1981) и V.B.Morhenn с соавторами (V.B.Morhenn, C.V.Benike et al. 1982) показали, что кератиноциты, подвергшиеся культивированию не активизируют главный комплекс гистосовместимости, который как известно вызывает наиболее выраженную реакцию отторжения аллоклеток. Основываясь на полученных данных J.M.Hefton c cоавторами (Hefton J.M., Finkelstein J., Madden M.R., Shires G.T., 1983) провели первую успешную трансплантацию культивированных аллогенных кератиноцитов трем пациентам с дермальными ожогами. Метод позволял закрывать раны не дожидаясь трехнедельного срока, необходимого для получения подложек с культивированными аутокератиноцитами, а также создавать банки аллогенных клеток. В дальнейшем транспланатция аллогенных кератиноцитов вошла в клиническую практику некоторых ожоговых центров в развитых странах мира (M.R.Madden, J.L.Finkelstein et al., 1986; A. Eldad et al., 1987; R.Fratianne, F.Papay et al. 1993; P.Brychta P. et al., 1995; Z.Dedoviс et al., 1998; С.Ф.Малахов с соавт., 1996; С.В.Смирнов с соавт., 1998). Накопленный клинический опыт показал, что оптимальные результаты получаются при трансплантации аллокератиноцитов на дермальные ожоги и донорские раны с частично сохранившимся эпителием, существенно укорочивая сроки их заживления. Трансплантации на полнослойные раны были менее удачны и повидимому не являются методом выбора при их лечении. Результаты проведенных исследований, направленных на изучение дальнейшей судьбы аллогенных кератиноцитов (V.Gielen, M.Faure, et al., 1987; K.Hancock, M.E.Hackett 1989), в частности при помощи фингерпринтинга ДНК (A.E.Vaan der Merwe et al. 1990) показали, что со временем они элиминируются и постепенно замещаются аутоклетками. На конференции Европейского сообщества по эквивалентам кожи в Лионе в 1989 году была принята общая концепция, согласно которой аллокератиноциты рассматривают как временную биологическую повязку, производящую экстрацеллюлярный матрикс и стимулирующую пролиферацию собственного эпителия больного.

Отсуствие дермы при глубоких ожогах обусловило разработку методов её восстановления, поскольку трансплантация культивированных аутологичных и аллогенных кератиноцитов не решает этой задачи. Для её решения в настоящее время наметилось два основных направления — использование аллогенной дермы и создания аналога дермы в условиях in vitro.

Аллогенную кожу трупов для временного закрытия обширных глубоких ожогов используют в комбустиологии с 1953 года (J.B.Brown, M.P.Fryer et al. 1953). О возможности постоянного закрытия глубоких ожоговых ран аллогенной кожей, лишенной эпидермиса, было сообщено в 1985 году E.L.Heck с соавторами (E.L.Heck et al. 1985). Основываясь на полученных данных C.Cuono с соавторами в 1986 году (C.Cuono et al., 1986) провели первую успешную трансплантацию культивированных аутокератиноцитов на аллодерму. В своей работе они использовали трупную кожу, прошедшую криообработку, которая накладывалась на раны после хирургической некрэктомии глубоких ожогов. После подготовки подложек с культивированными аутокератиноцитами эпидермис трупной кожи удалялся, а на оставшуюся аллогенную дерму переносили подложки с культивированными аутокератиноцитами. и R.L.Sheridan и R.G.Tompkins (1995) сообщают о приблизительно равной площади лизиса аутокератиноцитов, трансплантированных на трупную дерму и непосредственно на раневую поверхность у больных с обширными ожогами. И в том и в другом случае лизис пересаженных культивированных кератиноцитов составил в среднем 49 % от площади трансплантации.

В последующем для уменьшения иммунореактивности аллогенной дермы был предложен её бесклеточный вариант. В результате специальной обработки аллодерма утрачивала клетки, но сохраняла свою внеклеточную структуру — естественно расположеные коллагенновые волокна, базальную мембрану и др. Один из вариантов её применения предполагает имплантацию ацеллюлярной дермы на полнослойные ожоговые раны с одновременной аутодермопластикой сверху тонким кожным трансплантатом (A.S.Livesy, D.N.Herndon et al., 1995; Wainwright D.J. 1995; V.Lattari, L.M.Jones et al., 1997). В других работах проводилось культивирование кератиноцитов на сосочковом слое бесклеточной дермы с созданием исскуственного аналога полнослойной кожи (D.A.Medalie , R.G.Tompkins et al., 1996; H.O.Rennekampff, О. V.Kiessig et.al. 1997). Во всех проведенных исследованиях отмечалось проникновение в трансплантированную ацеллюлярную дерму фибробластов, эндотелиальных клеток, прорастание сосудов со стороны раневого ложа по направлению их естественного хода. Толщина такой «неодермы» превышала толщину «неодермы» после традиционной аутодермопластики. Имеются публикации сообщающие о одновременном культивировании кератиноцитов на сосочковом слое аллодермы и фибробластов на её нижней поверхности (E.Matouskova et al., 1993; M.M.Ghosh, S.Boyce et. al., 1997). Однако клинический опыт применения бесклеточной дермы в настоящее время невелик и не позволяет сделать окончательных выводов о её преимуществе перед другими методами восстановления полнослойных дефектов кожи. Так, чешские исследователи E.Matouskova и соавторы (1994, 1997) на основании собственных клинических наблюдений с применением аналога кожи, состоящего из ацеллюлярной свиной дермы и культивированных кератиноцитов человека (RHPS-recombined human/pig skin) у больных с глубокими ожогами и донорскими ранами считают, что бесклеточную ксенодерму можно использовать только как носитель культивированных клеток, перемещаемый на рану вверх дном, то есть, с предлежанием культивированных кератиноцитов непосредственно к раневой поверхности.

Вторым направлением для восстановления дермы при глубоких ожогах стало создание биополимерных покрытий. Одна из наиболее известных моделей, предложеная J.F.Burke и I.V.Yannas (1981), получившая название искусственной кожи (artificial skin), состояла из двух слоев, верхнего — тонкой силиконовой пленки и нижнего, представляющего собой биодеградирующую пористую мембрану из перекрестно связанного коллагена и хондроитин-6-сульфата. Исскуственная кожа накладывалась на раны, образующиеся в результате хирургической некрэктомии глубоких ожогов. В течение двух-трех недель в поры нижнего слоя проникали фибробласты и эндотелиталиальные клетки больного, прорастали сосуды, одновременнно с этим происходила биодеградация самого нижнего слоя, состоящего их коллагена и хондроитин-6-сульфата. В результате чего образовывалась ткань более похожая на дерму, чем на рубец (J.F.Burke 1981). После образования «неодермы» верхний силиконовый слой удалялся и производилась аутодермопластика тонким трансплантатом толщиной примерно 0,1 мм. Использование такого тонкого трансплантата обусловливало быструю эпителизацию донорских ран и позволяло брать повторно трансплантаты с одного и того же места с небольшими интервалами (Yannas I.V., Burke J.F. et al. 1982). Следует отметить, что клинические результаты использования «исскуственной кожи» при лечении 106 обожженных в нескольких ожоговых центрах США показали более высокий уровень её лизиса в сравнении с традиционной аутодермопластикой — в среднем 20 % и 5 % соответственно. Хотя косметические результаты в случаях её приживления исследователями были оценены как несколько лучшие (D.Heimbach, A.Luterman, J.F.Burke et al. 1988).

J.Hansbrough, S.Boyce (1988) предложили свой вариант клеточно-биополимерного покрытия. Предложенный авторами культивированный заменитель кожи (cultured skin substitut), представлял собой пористую биодеградирующую мембрану, состоящую из перекрестно связанных коллагена и хондроитин-6-сульфата, на верхней поверхности которой, лишенной пор, культивировали кератиноциты и затем после получения монослоя культуры в таком виде переносили на раны, образовавшиеся в результате хирургической некрэктомии глубоких ожогов. Следующий вариант покрытия (J.Hansbrough, S.Boyce 1989) был дополнен культивированием фибробластов на нижней поверхности мембраны. В другой работе культивированные кератиноциты на верхней поверхности были заменены тонким аутодермотрансплантатом (J.Hansbrough, 1992). Однако при клиническом применении лизис таких покрытий был выше по сравнению с традиционной аутодермопластикой (S.T.Boyce, M.J.Goretsky, Greenhalgh et al. 1995).

Группа исследователей из Массачусетского технологического института и Гарвардской медицинской школы (E.Bell, H.P.Ehrlich et al. 1981) разработали так называемый «живой эквивалент кожи» (living skin equivalent), представляющий собой коллагеновый гель, включающий культивированные фибробласты, сверху покрытый культурой кератиноцитов. Имеются как положительные так и критические отзывы в литературе, описывающие клинический опыт применения «живого эквивалента кожи» (J.Nanchahal, R.Dover, W.R.Otto, S.K.Dhital 1989; D.Wasserman, et. al. 1988).

Причинами не всегда удачных результатов использования покрытий, содержащих коллаген по мнению ряда авторов (В.П.Туманов 1996; D.Wasserman et.al., 1988; M.Koide, K.Osaki et al. 1993; Matsuda et al. 1997) являются: снижение пролиферативной активности фибробластов, находящихся в контакте с коллагеном; повышение уровня синтеза коллагеназ; неустойчивость такого рода искусственных покрытий к воздействию ферментов и инфекции.

Одним из существенных недостатков применения культивированных аутокератиноцитов является длительный срок их приготовления, занимающий в среднем три недели. Для сокращения срока подготовки клеточных культур предложены методы выращивания кератиноцитов непосредственно на носителях, которые затем перемещают на рану. Такой технологический прием позволяет «уйти» от травматичного этапа классической методики по J.Rheinwald и H.Green — отделения пласта культуры кератиноцитов ферментом диспазой перед её переносом на подложки, во время которого по данным H.Green может повреждаться до 50 % базальных клеток культуры. Кроме того, предполагается, что носители стимулируют пролиферацию культивированных кератиноцитов на раневой поверхности. Эти обстоятельства позволяют сократить срок подготовки к трансплантации по сравнению с классическим методом. В качестве носителей предложены: коллагенновые подложки (M.J.Morykwas, T.R.Stevenson, C.L.Marcelo et al. 1989), фибриновый гель (H.W.Kaiser, G.B.Stark, J.Kopp et. al. 1994; Spilker G., Reifenrath M.W., Kaiser H.W. 1996), подложки, состоящие из композиций коллагена, гликозаминогликанов и хитозана (P.Y.Gueugniaud, A.Fabreguette, L.Oddou et al., 1997), на основе гиалуроновой кислоты (S.R.Myers, J.Grady et al. 1997) и др. Предложено также использование микроносителей (С.Ф.Малахов с соавт., 1997, С..В.Смирнов с соавт., 1998; J.Hecht, E.A.Hoefter et al., 1997). Однако для окончательных выводов о эффективности этих методов необходимо дальнейшее накопление и изучение клинического опыта.

В Институте хирургии им.А.В.Вишневского РАМН разработан и внедрен в клиническую практику новый метод лечения обширных ран у обожженных, принципиально отличающийся от ранее предложенных, основанный на использовании культуры аллогенных фибробластов (Д.С.Саркисов, В.П.Туманов с соавт., 1990; В.Д.Федоров, Д.С.Саркисов с соавт., 1993; Д.С.Саркисов, А.А.Алексеев с соавт., 1994). Предпосылкой к его разработке стали предшествовашие фундаментальные исследования регенераторного процесса, показавшие ключевую роль в нем фибробластов (В.В.Серов, А.Б.Шехтер, 1982; Е.А.Ефимов 1984; Л.И.Бобро 1990; B.Coulomb, L.Dubertret et. al., 1984; B.Coulomb, P.Satag, et al. 1986), а также установившие факт частичной потери фибробластами поверхностных антигенов гистосовместимости в процессе культивирования (P.Хэй 1989; J.Nanchahal, et al. 1989).

Патогенетический механизм действия предложенного метода заключается в синтезе аллогенными фиброластами экстрацеллюлярного матрикса, факторов роста, стимуляции пролиферации собственного эпителия, направленных на восстановление как эпидермального так и дермального компонента кожи. При ожогах IIIА степени, донорских и длительно незаживающих ранах трансплантацию 3-х дневной культуры аллофибробластов осуществляют непосредственно на подготовленные в результате комплексного лечения раны. При глубоких ожогах IIIB-IV степени трансплантацию аллофибробластов сочетают с аутодермопластикой с коэффициентом расширения 1:6 и более. В последнем случае аллофибробласты стимулируют эпителизацию ячеек аутотрансплантата.

Накопленный клинический опыт в различных ожоговых центрах и отделениях (А.А.Алексеев, А.Ю.Яшин 1996; А.А.Алексеев, Д.А.Саркисов с соавт., 1997; С.И.Воздвиженский, Л.И.Будкевич с соавт., 1996; Матчин Е.Н., Потапов В.Л., Огольцова В.А. 1996; Д.Я.Алейник, В.А.Аминев с соавт. 1998; Н.М.Кузнецов, О.Н.Мазка с соавт. 1998), показал его высокую эффективность. Преимуществами метода являются — небольшие сроки культивирования аллофибробластами (3 суток), хорошее приживление трансплантатов (в среднем 97 %), возможность создания банка аллогенных клеток, относительно небольшая себестоимость.

Таким образом, разработка методов лечения с использованием культивированных клеток кожи и её эквивалентов уже привела к значительному прогрессу и расширению возможностей оказания помощи обожженным, вместе с тем научный поиск оптимальных методов восстановления дермы и эпидермиса продолжается, оставаясь актуальной проблемой в комбустиологии.

Cписок литературы

  1. Алейник Д.Я., Аминев В.А., Чарыкова И.Н., Кувакина Н.А. Использовние современных биотехнологий для лечения поверхностных ожогов у детей младшего возраста // Материалы II Международного симпозиума «Новые методы лечения ожогов с ипсользованием культивированных клеток кожи. Саратов 1998 стр.6-8.
  2. Алексеев А.А., Яшин А.Ю. Комбинированная аутодермопластика с трансплантацией культивированных фибробластов при обширных глубоких ожогах: клинические результаты и перспективы //Межд.симп.»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» г.Тула 1996 стр.1-3
  3. Алексеев А.А., Саркисов Д.С., Яшин А.Ю., Кашин Ю.Д., Крутиков М.Г. Восстановление кожных покровов на основе применения культвированных аллофибробластов // Материалы городской научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в лечении тяжелообожжённых. Москва — 1997 — стр. 52.
  4. Атясов Н.И., Матчин Е.Н. Восстановление кожного покрова тяжелообожженных сетчатыми трансплантами. Саранск 1989 г.
  5. Бобро Л.И. Фибробласты и их значение в тканевых реакциях // Архив патологии 1990 т.52 N 52 стр.65-68.
  6. Васильев А.В., Емельянов А.В., Терских В.В., Смирнов С.В. Создание банка кожных клеточных трансплантатов: принципы и перспективы // Материалы городской научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в лечении тяжелообожжённых — Москва — 1997 — стр. 27.
  7. Воздвиженский С.И., Будкевич Л.И., Саркисов Д.С., Алексеев А.А., Туманов В.П., Шурова Л.В. Применение активной хирургической тактики и культуры аллофибробластов в детской клмбустиологии // Межд.симп.»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» г.Тула 1996 стр.3-4
  8. Ефимов Е.А. О вариабельности полноты регенерации кожи // В кн.:Клеточные основы регенерации млекопитающих М., 1984 с.78-86.
  9. Киселев С.И. Значение донорских ресурсов кожи в выборе рациональной хирургическкой тактики у больных с глубокими ожогами: Автореф.дис. … канд.мед.наук. Рязань, 1971. 17 с.
  10. Кузнецов Н.М., Мазка О.Н., Шанина Л.Н. с соавторами. Применение культивированных клеток для закрытия дефектов кожи // Материалы II Международного симпозиума «Новые методы лечения ожогов с ипсользованием культивированных клеток кожи. Саратов 1998 стр.20-
  11. Малахов С.Ф., Терских В.В., Бактин Е.А., Васильев А.В., Парамонов Б.А. Аутотрансплантация выращенных вне организма эпидермальных кератиноцитов с целью лечения общирных ожогов // Вестн.хирургии им.Грекова 1993 N 4 стр.59-62.
  12. Малахов С.Ф., Васильев А.В., Терских В.В., Логинов Л.П., Смирнов С.В., Парамонов Б.А. Перспективы биотехнологических методов восстановления кожных покровов // Межд.симп.»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» г.Тула 1996 стр.6-7.
  13. Малахов С.Ф., Парамонов Б.А., Емельянов А.В., Васильев А.В., Терских В.В. Новые подходы к лечению тяжелых ожогов: трансплантация выращенных в культуре кератиноцитов // Военно-медицинский журнал 1997 Том 318 N 9 стр.16-19
  14. Матчин Е.Н. Активная хирургическая тактика при лечении глубоких ожогов в условиях Донской городской больницы Тульской области:Автореф.дис. … канд.мед.наук. Рязань, 1975. 17 с.
  15. Матчин Е.Н., Потапов В.Л., Огольцова В.А. Применение культуры фибробластов в комплексном лечении тяжелоообожженных // Межд.симп.»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» г.Тула 1996 стр.7-8.
  16. Огольцова В.А. Клинико-морфологические результаты восстановления кожного покрова сетчатыми трансплантатми у тяжелообожженных: Автроеф.дис. …канд.мед.наук. Харьков, 1982. 16 с.
  17. Рудковский В., Назиловский В., Зиткевич К.Теория и практика лечения ожогов. М.Медицина, 1980. 375 с.
  18. Саркисов Д.С., Туманов В.П., Глущенко Е.В. с соавт. Использование культивированных фибробластов при лечении обожженных // БЭБиМ. 1990 — N3 — с.400-402.
  19. Саркисов Д.С., Алексеев А.А. и др. Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробластов при восстановлении целостности кожного покрова // Вестн.РАМН 1994 N 7 стр.6-11.
  20. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология). М., Медицина 1982 312 стр.
  21. Смирнов С.В., И.В.Киселев, А.П.Заиконникова, А.В.Васильев, В.В.Терских. Жизнеспособность кожных и эпидермальных клеточных трансплантатов:современное состояние и перспектива развития проблемы //Материалы 2 Межд.конгресса»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи. 1998. Саратов с.37-40.
  22. Туманов В.П. Способ получения трансплантата из культивированных фибробластов человека для лечения обожженных //Межд.симп.»Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» г.Тула 1996 стр.11
  23. Федоров В.Д., Саркисов Д.С., Туманов В.П., Глущенко Е.В. Применение культивированных фибробластов при ожогах кожи // Врач — 1993 — N 11 — c.26-28.
  24. Хэй Р. Сохранение и оценка качества клеток // в кн.: культура животных клеток / Под ред. З.Фрешни. — М.: Мир, 1989. — с.108-164.
  25. Banks-Schlegel S., Green H. Formation of epidermis by serially cultivated epidermal cells transplanted as an epithelium to athymic mice // Ibid.1980 Vol.29 N 4 p.308-313.
  26. Bell E., Ehrlich H.P, Sher S. et al. Development and use of a living skin equivalent //J.Plastic & Reconstruct.Surg. 1981b. Vol.67, N 3, p.386-392.
  27. Bell E., Ehrlich H.P., Buttle D.J., Nakatsuiji T. Living tissue formed in vitro and accepted as skin-equivalent tissue of full thickness //Science 1981 Vol.211 N 6 p.1052-1054.
  28. Boyce S.T., Hansbrough J.F. Biologic attachment, growth, and differentiation of cultured human epidermal keratinocytes on a graftable collagen and chondroitin-6-sulfate substrate // Surgery 1988 Vol 103 N 4 p.421-431.
  29. Boyce S.T., Goretsky M.J., Greenhalgh et al. Comparative assesment of cultured skin substituces and native skin autograft for treatment of full-thickness burns //Annals of surgery 1995 Vol.222 p.743-752.
  30. Bouvard V., Germain L., et al. Influence of dermal equivalent maturation on development of cultured skin equivalent // Biochem. & Cell Biol. — 1992 — Vol.70 — N 1 — p.34-42.
  31. Brown J.B., Fryer M.P., Ronda U.P., Lu M. Post mortem homografts as biological dressings for extensive burns and denuded areas // Ann Surgery 1953; 138::618.
  32. Brychta P., Suchanek I., Rihova H. et al. Cultured epidermal allografts for the treatment of deep dermal burns // Acta Chir.Plast 1995 Vol.37 p.20-24.
  33. Burke J.F. Observation on the development of an artificial skin: Presidental address 1982 //J.Trauma. 1983. Vol.23. p.543-551.
  34. Burke J.F., Yannas I.V. Succesful use of physiologically acceptable artificial skin in the treatment of extensive burn inyary // Am Surg — 1981 — V 194 — p 413-428
  35. Carney S.A. Generation of autograft; the state of the art //Burns 1986 Vol.194 N 4 p.413-427.
  36. Coulomb B., Dubertret L., Merrill C. et al. The collagen lattice: a model for studying the physiology, biosyntetic function and pharmacology of the skin // British J. of Dermat. 1984 Vol.3 N p.83-87.
  37. Coulomb B., Satag P., Bell E. et al. A new method of studing epidermalization in vitro // Br.J.Dermatol. 1986 Vol.114 p.91-101
  38. Compton C., Trookman N., Roy D., et al. The clinincal utility and wound healing potential of cultured epithelial cells in the treatment of burn wounds // Cell Biochem. — 1993 — Suppl.17 E — p.108.
  39. Cuono C.B. Langdon R., McGuire J. Use of cultured epidermal autografts and dermal allografts as skin replacement after burn injure // Lancet 1986 Vol.1 p.1123-1124.
  40. Cuono C.B., Langdon R., et al Composite antologus — allogenic skin replacements: Development & clinical application //Plast Reconstr Surg 1987 Vol.80 N 4 p.626-635.
  41. De Luca M., Albanese E., Bondanza S., et al. Multicentre experience in the treatment of burns with autologous and allogenic cultured epitelium, fresh or preserved in a frozen state //Burns 1989 Vol 15 N5 p.303-309.
  42. Dedovic Z., Koupilovia I., Suchanek I. Keratinocytes as biological dressing in the treatment of partial-thickness burns in children // Ann. Burns and Fire Disasters 1998 Vol 11 N 1 p.37-40.
  43. Eldad A., Burt A., Clarke J.A., Gusterson B. Cultured epithelium as a skin substitute //Burns 1987 Vol.13 N 3 p.173-180.
  44. Fedorov V.D., Sarcisov D.S., Alexeev A.A. et.al. New methods of treatment of burned patients with cultured allofibroblasts // 9th Congress of the international Society for Burn Injuries, 27 June — 1 July, 1994, Paris, France, p. 31.
  45. Fratianne R., Papay F., Housini I., Lang C. et al. Keratinocyte allografts accelerate healing of split-thickness donor sites; application for improved treatment of burns // J.Burn Care Rehabil., 1993 Vol.14 p.148-154.
  46. Galico G.G., O’Connor N.E., Compton C.C. et al. Permament coverage of large burn wounds with autologous cultured human epithelium //New Engl.J.Med. 1984 Vol.311 N 7 p.448-454.
  47. Galico G.G., O’Connor N.E. Cultured epithelium as a skin substitute //Clinics in Plast.Surg. 1985 Vol.12 N 2 p.149-157.
  48. Ghosh M.M., Boyce S., Layton C., Freedlander E., MacNeil S. A comparison of methologies for preparation of human epidermal-dermal composites // Ann Plast Surgery 1997 Vol.39 N 4 p.390-404.
  49. Gielen V., Faure M., Mauduit G., Thivolet J. Progressive replacement of human cultured epithelium allograft by recipient cells as evidence by HLA class I expression // Dermatologica 1987 Vol.175 p.166-170.
  50. Gueugniaud P.Y., Fabreguette A., Oddou L., Petit P., Collombell C., Damour O. Use of biological film as a cultured epidermal autograft support in the treatment of burns: preliminary report of a new technique // Ann. Burns and Fire Disasters 1997 Vol 10 N 1 p.33-39.
  51. Hansbrough J.F. Current status of skin replacements for coverage extensive burn wounds. J.Trauma 30:S155, 1990.
  52. Hansbrough J.F. Boyce S.T. et al Burn wound closure with CAE & fibroblasts attached on to a collagen-glycosaminoglycan substrate // JAMA 1989. Vol.262 N15 p.2125-2130.
  53. Hecht J., Hoefter E.A., Haraida S., Nerlich A. et al. Kultivierte Keratinozyten auf Microcarrien: In vitro Untersuchungen zu einem neuartigen Tragersystem // Handchir Microchir Plast Chir 1997 Vol.29 N 2 p.101-106.
  54. Heck E.L., Bergstresser P.R., Baxter C.R. Composite skin graft: frozen dermal allografts support the engraftment and expansion of autologous epidermis // J.Trauma — 1985 — Vol.25 — p.106-112.
  55. Hefton J.M.., Amberson J.G., Biozes D.G., Weksler M.E. Human epidermal cells no longer stimulate allogenic lymphocytes after growth in culture // J.Invest.Dermatol. 1981 Vol.76 p.308-309.
  56. Hefton J.M., Finkelstein J., Madden M.R., Shires G.T. Grafting of burn patients with allografts of cultured epidermal cells // Lancet 1983 Vol.2 N 8347 p.428-430.
  57. Heimbach D, Luterman A, Burke J.F. et al. Artificial dermis for major burns. A multi-center randomized clinical trial // Ann Surgery 1988. Vol.208 N 3 p.313-320.
  58. Herzog S.R., Meyer A., Woodley D.,Peterson H.D. Wound coverage with cultured autologous keratinocytes. Use after burn wound exision including biopsy follow-up // J.Trauma 1988 Vol.28 N 2 p.195-198.
  59. Kaiser H.W., Stark G.B., Kopp J. et al. Cultured autologous keratinocytes in fibrin glue suspension, exclusively and combined with STS-allgraft (prelimenary clinical and histological report of new technique) // Burns 1994 Vol.20 N 1 p.23-29.
  60. Koide M., Osaki K., Konisxhi J., et al. A new type of biomaterialfor artificial skin: dehydrothermally cross-linked composites of fibrillar and denatured collagens // J.Biomedical Materials Research 1993 Vol.27 p.79-87.
  61. Kumagai M. Clinical application of autologous cultured epithelia for the treatment of burn wounds and burn scars // Plast. Reconstr.Surg. — 1988 — N 1 — p.99-111.
  62. Langdon R.C., Cuono C.B., Birchall N., et al. Reconstitution of structure and cell function in human skin grafts derived from cryopreserved allogenic dermis and autologous cultured keratinocytes // J.Inestigat.dermat. 1988 Vol.91 N5 p.478-485.
  63. Lattary V., Jones L.M., Varcellotti J.R., Latetenser B.A., Sherman H.F., Barrette R.R. The use of a permament dermal allograft in full-thickness burns of the hand and foot // J.Burn care & Rehabilitation 1997 18 (2) p.147-155.
  64. Livesy A.S., Herndon D.N., Hollyoak M.A. et al. Transplanted acellular allograft dermal matrix //Transplantation 1995 Vol.60 N 1 p.1-9.
  65. MacMillan B.G.The surgical and medical support of burn patients. Boston; Bristol; L., 1982. 180 p.
  66. Madden M.R., Finkelstein J.L., et al. Grafting of cultured allogenic epidermis on second-third-degree burn wounds on 26 patients // J.Trauma 1986 Vol.127 p.955-962.
  67. Matouskova E., Vogtova D., Konigova R. A recombined skin composed of human keratinocytes cultured on cell-free pig dermis // Burns 1993 Vol.19 p.118-123.
  68. Matouskova E., Bucek S., Vogtova D., Vesely P., Chaloupkova A., Broz L., Singernova H., Konigova R. Treatment of burns and donor sites with human allogenic keratinocytes grown on acellular pig dermis // Br.J.Dermatol 1997 136 (6) p.901-907.
  69. Medalie D.A., Tompkins D.A., Morgan J.R. Evalution of accelular human dermis as analog in composite skin graft // ASAIO J. 1996 Vol.42 N 5 p.455-462.
  70. Medawar P.R. The cultivation of adult mammalian skin epithelium in vitro // Quart.J.Microsc.Sci. 1948 Vol.89 p.187-196.
  71. Medalie-D.A, Tompkins-R.G, Morgan-J.R. Evaluation of acellular human dermis as a dermal analog in a composite skin graft // ASAIO-J. 1996 42(5): M455-62 ISSN: 1058-2916
  72. Morykwas M.J., Stevenson T.R., Marcelo C.L. et al. In vitro and in vivo testing of a collagen sheet to support keratynocyte growth for use as a burn wound covering // J.Trauma 1989 Vol29 N 8 p.1163-1167.
  73. Morhenn V.B., Benike C.V., Cox A.J., Englement E.G. Cultured human epidermal cells do not synthesize HLA-DR. // J.Invest.Dermatol 1982 Vol.78 p.32-37.
  74. Myers S.R., Grady J., Soranzo C.,Sanders R., Green C., Leigh I.M., Navsaria H.A. A hyaluronic acid membrane system for cultured keratinocytes: clinical «take» rates in the porcine kerato-dermal model // J.Burn Care & Rehabil. 1997 Vol. 18 N 3 p.214-222.
  75. Nanchahal J., Dover R., Otto W.R., Dhital S.K. Cultured composite skin grafts: biological skin equivalents permitting massive expansion //Lancet 1989 p.191-193
  76. O’Connor N.E., Mullitken J.B., Banks-Shlegel S. et al. Grafting of burns with cultured epithelium prepared from autologous epidermal cells // Lancet 1981 Vol.1 N 8210 p.75-78.
  77. Phillips T.J. Cultured epidermal allografts — a temporary or permament solution // Transplantation — 1991 — Vol.51 — N 5 — p.937-941.
  78. Rennekampff H.O., Kiessig V., Griffey S., Greenleaf G., Hansbrough J.F. Acellular human dermis promotes cultured keratinocyte engraftment_3 //_0 J-Burn-Care-Rehabil. 1997 Nov-Dec; 18(6) p.535-544.
  79. Rheinwald J.C., Green H. Serial cultivation of stains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells // Cells — 1975 — N 6 — p.331-344.
  80. Rheinwald J.C., Green H. Epidermal growth factor and the multiplication of cultured human epidermal keratinocytes // Nature 1977 Vol.265 N 3 p.421-424.
  81. Rives J.M., Sellam Ph., Karcenty B., et al. Cultured epithelial autografts (CEA) clinical applications in extensive burn injuries: Percy Burn Center Experiens // 9th Congress of the International Society for Burn Injuries, 27 June — 1 July, 1994 Paris, France, — p.153.
  82. Rue L.W., Cioffi W.G., McManus W.F. et al. // Wound closure and outcome in extensively burned patients treated with cultured autologous keratinocytes // The J. of Trauma — 1993 — Vol.34 — N5 — p.662-669.
  83. Schiozer W.A., Hartinger A., Von-Donnersmarck G.H., Muhlbauer W. Composite grafts of autogenic cultured epidermis and glycerol-preserved allogenic dermis for definitive coverage of full thickness burn wounds // Burns 1994 20 (6) p.503-507.
  84. Sheridan R.L., Tompkins R.G. Cultured autologous epithelium in patients with burns of Ninety percent or more of the body surface // J.Trauma — 1995 — V 38 — N 1 — p.48-50.
  85. Spilker G., Reifenrath M.W., Kaiser H.W. Die Hautzuchtung bei der Behandlung Schwerstverbrannter // Langenbecks-Arch-Chir-Suppl-Kongressbd. 1996; 113: 1149-55
  86. Tanner J.C., Vandeput J., Olley J.E. The mesh skin graft // Plast. Reconstr. Surg. 1964 Vol.34 p.287-292.
  87. Teepe R., Kreis R.W., Koebrugge E.J., et al. The use of cultured autologous epidermis in the treatment of extensive burn wounds // The J. of Trauma — 1990 — Vol.30 — N 3 — p.269-275.
  88. Wainwright D.J. Use of an accelular allograft dermal matrix (Alloderm) in the management of full-thickness burns // Burns 1995 Vol.21 N 4 p.243-248.
  89. Wasserman D., Schlotterer M., Toulon A., et al. Preliminary clinical studies of a biological skin equivalent in burned patients // Burns 1988 Vol.14 N 4 p.326-330.
  90. Vaan der Merwe A.E., Mattheyse F.J., Bedford M.,, et al. Allografted keratinocytes used to accelerate the treatment of burn wounds are replaced by recipient cells // Burn 1990 Vol.16 p.193-197.

 

>>